癌症是当今世界上死亡率较高的疾病之一, 它对人类的健康造成严重危害[1]. 乳腺癌是最常见的癌症, 也是全球女性癌症死亡的主要原因[2]. 在药物化学领域众多经典药效团中, 吡啶并嘧啶及其他含氮双环杂环化合物占据重要地位, 其中研究最为广泛的是吡啶并[2,3-d]嘧啶类衍生物. 已有研究表明, 该类化合物具有抗惊厥、抗菌、抗癌、解热及镇痛等多种药理活性[3]. 例如2015年美国食品药品监督管理局(FDA)审批通过了帕博西尼(Palbociclib)联合来曲唑, 用于治疗绝经后HR＋/ HER2-晚期或转移性乳腺癌[4]. 帕博西尼含有吡啶[2,3-d]嘧啶结构, 临床上用于乳腺癌治疗. 但患者在化疗一定周期后常出现疗效降低、耐药性增强等问题[5]. 因此, 研发新型抗乳腺癌药物仍具有重要意义[6].
鉴于帕博西尼成功上市, 许多具有类似结构的化合物被设计和开发. 帕博西尼的分子骨架以吡啶并[2,3-d]嘧啶酮为核心, 衍生物的分子设计均保留了这一关键母核结构[6]. Wang等[7]通过用各种氨基甲酸酯和酰胺修饰帕博西尼的哌嗪环, 合成了一系列新的帕博西尼衍生物. 例如化合物A和B(图1)显示出显著的细胞毒性, 尤其是化合物B, 其抗增殖活性优于帕博西尼. 江苏恒瑞制药有限公司将哌啶环代替帕博西尼结构中的哌嗪环, 开发得到达尔西利(Dalpiciclib)[8], 已经获得国家药品监督管理局(NMPA)的临床试验批件, 正在进行三期临床试验. 达尔西利主要针对HER2阴性、雌激素受体阳性(HR＋/HER2-)的晚期或转移性乳腺癌患者[9-11]. Shan 等[12]基于帕博西尼的支架, 设计并合成了一系列针对氨基酸Thr107的衍生物. 构效关系研究表明, 含有α-卤代酮结构的化合物活性最强, 代表性化合物C(图1)表现出高效和高选择性的抑制作用.
异吲哚酮是许多具有重要生物、药物活性化合物的基本骨架结构. 作为一类杂环生物碱，其主要存在于天然产物(如Cichorine[13]和Vitedoamine A[14])以及部分重要的合成药物中. 例如2005年美国FDA批准来那度胺(Lenalidomide)(图1)上市, 用于多发性骨髓瘤的治疗[15-17].
1 结果与讨论
1.1 化合物的合成
如Scheme 1所示, 2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(1)与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)在引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)催化下, 在2位甲基发生自由基反应, 生成苄溴中间体2; 中间体2与不同的伯胺反应, 通过亲核取代反应和胺酯交换反应, 生成中间体3a~3m; 在锌粉和氯化铵体系下, 把中间体3a~3m的硝基还原为胺基, 得到中间体4a~4m; 以帕博西尼(Palbociclib)为起始原料, 在碳酸钾作用下与溴代乙酸乙酯发生亲核取代反应, 制得中间体5; 中间体5在氢氧化钠条件下发生酯水解反应, 反应结束后用稀盐酸调节pH至中性, 得到羧酸中间体6; 利用缩合剂(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)把中间体4a~4m、来那度胺与中间体6生成酰胺键, 得到最终化合物7a~7n.
1.2 化合物的抗肿瘤活性
选用噻唑蓝(MTT)检测方法[18]评价该类化合物对肿瘤细胞(MCF-7)的抑制作用, 其IC50值见表1. 从表1可以看出, 化合物7c、7d、7i和7l对肿瘤细胞(MCF-7)具有较强的抑制作用, 优于阳性对照药帕博西尼, 其中化合物7i对MCF-7的抑制活性最强, 其IC50值为15.85 μmol/L; 对比化合物7a~7n对MCF-7的抑制活性发现, 取代基R的种类对化合物抗肿瘤活性有明显影响, R为烷基和环烷基取代基时的抑制活性优于R为苯基和吡啶取代基, R为异丙基、异丁基、正己基、四氢吡喃基、4-氟苯基和三甲氧基苯基时, 所得产物对于肿瘤细胞(MCF-7)具有更强的抗肿瘤活性和特异选择性, 其抑制活性顺序为: 四氢吡喃基>异丙基>三甲氧基苯基>异丁基>4-氟苯基>正己基, 这可能是由于这些产物对于相应肿瘤细胞而言, 具有更适宜的电子效应和空间结构, 显示其作为抗癌药物的巨大潜力. 因此, 深入研究该系列产物的抗肿瘤机制具有深远意义, 值得进一步的优化研究. 基于现有含异吲哚酮的吡啶并[2,3‑d]嘧啶衍生物的构效关系结果, 对其进行进一步结构优化具有较高研究价值, 相关研究工作正在开展.
表1 化合物7a~7n对肿瘤细胞的体外抗增殖活性Table 1 Anti-cancer activity of the synthetic derivatives 7a~7n |
| Compd. | IC50/(μmol/L) |
|---|---|
| 7a | >200 |
| 7b | 188.6±0.22 |
| 7c | 22.91±0.19 |
| 7d | 28.65±1.26 |
| 7e | 77.26±0.40 |
| 7f | >200 |
| 7g | 47.22±10.09 |
| 7h | 183.94±0.24 |
| 7i | 15.85±0.25 |
| 7j | 138.77±0.51 |
| 7k | 43.89±7.14 |
| 7l | 25.26±3.39 |
| 7m | >200 |
| 7n | >200 |
| Palbociclib | 42.28±9.72 |
2 结论
本文利用拼合原理, 设计并合成了14个未见文献报道的新型含异吲哚酮的吡啶并[2,3-d]嘧啶衍生物. 抗肿瘤活性筛选结果显示, 化合物7i对肿瘤细胞(MCF-7)的抑制作用最强, 表明该化合物具有治疗乳腺癌的潜在优势, 是治疗乳腺癌的一种潜在药物. 上述研究结果为研发新型含吲哚酮的吡啶并[2,3-d]嘧啶衍生物提供了新的先导化合物, 具有重要的理论研究意义和潜在的临床应用价值. 本课题组将以此为基础继续结构优化, 进一步开发出高活性的治疗乳腺癌药物.
3 实验部分
3.1 仪器与试剂
YRT-3型熔点仪(温度计未校正); Bruker AV 400 MHz型核磁共振仪(DMSO-d6, 以CDCl3为溶剂, TMS为内标); Agilent 6540 Q-TOF (ESI)型质谱仪; Thermo 3111型二氧化碳细胞培养箱、BDS200倒置生物显微镜、Spectra Max I3多功能酶标仪. 所用试剂均为市售分析纯; 肿瘤细胞(MCF-7)来着中国科学院上海细胞库.
3.2 实验方法
3.2.1 中间体2的合成
中间体2的合成参照文献[19].
3.2.2 中间体3a~3m的合成
将中间体2 (7.3 mmol)、不同取代基的伯胺(8.8 mmol)、三乙胺(8.8 mmol)及N,N-二甲基甲酰胺(DMF, 30 mL)加入100 mL圆底烧瓶瓶中, 搅拌, 加热80 ℃. 薄层层析(TLC)检测反应, 待反应完后, 冷却至室温. 用乙酸乙酯萃取, 有机相依次用饱和食盐水洗涤3次, 无水Na2SO4干燥, 浓缩蒸干, 经柱层析分离(洗脱剂: 乙酸乙酯/石油醚, V∶V=1∶3)得到中间体3a~3m.
2-甲基-4-硝基异吲哚-1-酮(3a): 淡黄色固体, 产率74%. m.p. 124~126 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 3.11 (s, 3H), 4.88 (s, 2H), 7.78 (t, J=10.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J=10.0 Hz, 1H), 8.40 (d, J=10.8 Hz, 1H). HRMS (ESI) calcd for C9H9N2O3 [M＋H]＋ 193.0608, found 193.0607.
2-乙基-4-硝基异吲哚-1-酮(3b): 棕色固体, 产率87%. m.p. 123~125 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.21 (t, J=7.2 Hz, 3H), 3.60 (dd, J=14.8, 7.2 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H), 7.79 (t, J=7.6 Hz, 1H), 8.09 (d, J=7.6 Hz, 1H), 8.41 (d, J=8.0 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 13.7, 36.7, 50.4, 126.9, 129.7, 130.4, 136.2, 137.8, 143.6, 165.2. HRMS (ESI) calcd for C10H11N2O3 [M＋H]＋ 207.0764, found 207.0758.
2-异丙基-4-硝基异吲哚-1-酮(3c): 类白色固体, 产率75%. m.p. 155~157 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.37 (d, J=6.4 Hz, 6H), 4.66~4.73 (m, 1H), 4.83 (s, 2H), 7.71 (d, J=7.6 Hz, 1H), 8.17 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.38 (d, J=8.0 Hz, 1H). HRMS (ESI) calcd for C11H11N2O3 [M－H]－ 219.0775, found 219.0763.
2-异丁基-4-硝基异吲哚-1-酮(3d): 浅黄色固体, 产率82%. m.p. 93~95 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 0.99 (d, J=6.4 Hz, 6H), 2.09~2.19 (m, 1H), 3.49 (d, J=7.6 Hz, 2H), 4.87 (s, 2H), 7.71 (t, J=7.6 Hz, 1H), 8.19 (d, J=7.6 Hz, 1H), 8.40 (d, J=8.4 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 20.1, 27.7, 50.2, 51.6, 126.5, 129.7, 130.0, 136.4, 136.8, 143.4, 166.2. HRMS (ESI) calcd for C12H15N2O3 [M＋H]＋ 235.1077, found 235.1075.
2-叔丁基-4-硝基异吲哚-1-酮(3e): 浅黄色固体, 产率79%. m.p. 111~114 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.62 (s, 9H), 4.93 (s, 2H), 7.68 (t, J=8.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.37 (d, J=8.0 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 28.0, 49.5, 55.0, 126.3, 129.5, 129.6, 136.3, 137.8, 143.2, 166.2. HRMS (ESI) calcd for C12H15N2O3 [M＋H]＋ 235.1077, found 235.1075.
2-环戊基-4-硝基异吲哚-1-酮(3f): 淡橙色固体, 产率75%. m.p. 147~150 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.62~1.76 (m, 2H), 1.77~1.80 (m, 4H), 1.90~1.92 (m, 2H), 4.55~4.63 (m, 1H), 4.90 (s, 1H), 7.81 (t, J=7.6 Hz, 1H), 8.11 (d, J=7.4 Hz, 1H), 8.42 (dd, J=0.8 Hz, J=8.0 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 24.4, 30.1, 47.6, 52.9, 126.9, 129.7, 130.4, 136.3, 137.8, 143.7, 165.4. HRMS (ESI) calcd for C13H15N2O3 [M＋H]＋ 247.1077, found 247.1074.
2-正己基-4-硝基异吲哚-1-酮(3g): 棕色固体, 产率80%. m.p. 58~60 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 0.86 (t, J=6.8 Hz, 3H), 1.27~1.29 (m, 6H), 1.62~1.68 (m, 2H), 3.56 (t, J=7.2 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H), 7.80 (t, J=7.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.41 (dd, J=0.7 Hz, J=8.1 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.4, 22.5, 26.4, 28.1, 31.4, 42.1, 50.9, 126.9, 129.8, 130.4, 136.1, 137.8, 143.7, 165.5. HRMS (ESI) calcd for C14H19- N2O3 [M＋H]＋ 263.1390, found 263.1388.
2-环己基-4-硝基异吲哚-1-酮(3h): 淡黄色固体, 产率80%. m.p. 168~170 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.19~1.25 (m, 1H), 1.34~1.44 (m, 2H), 1.58~1.68 (m, 3H), 1.80 (t, J=14.8 Hz, 4H), 4.01~4.08 (m, 1H), 4.88 (s, 2H), 7.81 (t, J=7.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J=6.9 Hz, 1H), 8.42 (dd, J=0.8, 8.2 Hz, 1H). HRMS (ESI) calcd for C14H17N2O3 [M＋H]＋ 261.1234, found 261.1231.
2-吡喃基-4-硝基异吲哚-1-酮(3i): 黄色固体, 产率78%. m.p. 166~168 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.72 (dd, J=2.3, 12.3 Hz, 2H), 1.85~1.96 (m, 2H), 3.44~3.50 (m, 2H), 3.95~3.98 (m, 2H), 4.26~4.32 (m, 1H), 4.92 (s, 2H), 7.81 (t, J=7.8 Hz, 1H), 8.13 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.43 (dd, J=0.8, 8.2 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 30.9, 47.8, 48.8, 66.8, 127.0, 129.8, 130.5, 136.2, 137.9, 143.7, 165.2. HRMS (ESI) calcd for C13H15N2O4 [M＋H]＋ 263.1026, found 263.1024.
2-间甲苯基-4-硝基异吲哚-1-酮(3j): 棕色固体, 产率85%. m.p. 169~171 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 2.37 (s, 3H), 5.39 (s, 2H), 7.04 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.76 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.83 (t, J=7.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J=7.4 Hz, 1H), 8.49 (d, J=8.1 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 21.7, 51.9, 117.3, 120.5, 125.9, 127.8, 129.4, 130.3, 130.8, 136.1, 137.0, 138.9, 139.1, 143.5, 164.8. HRMS (ESI) calcd for C15H13N2O3 [M＋H]＋ 269.0921, found 269.0917.
2-(4-氟苯基)-4-硝基异吲哚-1-酮(3k): 类白色固体, 产率80%. m.p. 238~240 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 5.43 (s, 2H), 7.32 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.87 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.94~7.98 (m, 2H), 8.23 (d, J=7.6 Hz, 1H), 8.51 (d, J=8.4 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 52.2, 116.2 (d, J=22.6 Hz), 122.4 (d, J=8.1 Hz), 127.9, 130.4, 130.8, 135.9, 137.0, 143.6, 160.7, 164.9. HRMS (ESI) calcd for C14H8FN2O3 [M－H]－ 271.0524, found 271.0518.
2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4-硝基异吲哚-1-酮(3l): 黄色固体, 产率76%. m.p. 200~202 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 3.87 (s, 3H), 3.94 (s, 6H), 5.31 (s, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.76 (t, J=8.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.45 (d, J=8.0 Hz, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 52.1, 56.4, 61.0, 98.0, 127.3, 130.1, 130.2, 134.5, 135.6, 135.8, 136.5, 143.3, 153.6, 164.9. HRMS (ESI) calcd for C17H15N2O6 [M－H]－ 343.0936, found 343.0962.
2-(2-吡啶基)-4-硝基异吲哚-1-酮(3m): 棕色固体, 产率68%. m.p. 189~191 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 5.58 (s, 2H), 7.14 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.73~7.80 (m, 2H), 8.26 (d, J=7.6 Hz, 1H), 8.45~8.49 (m, 2H), 8.58 (d, J=8.0 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 50.9, 114.3, 120.3, 127.7, 129.8, 130.3, 136.3, 136.7, 138.1, 143.6, 148.0, 151.1, 165.1. HRMS (ESI) calcd for C13H10- N3O3 [M＋H]＋ 256.0717, found 256.0705.
3.2.3 中间体4a~4m的合成
将中间体3a~3m (5.2 mmol)、锌粉(52.0 mmol)和氯化铵(52.0 mmol)、甲醇(20 mL)和四氢呋喃(20 mL)加入100 mL圆底烧瓶瓶中, 室温搅拌过夜. 薄层层析(TLC)检测反应. 待反应完后, 用布氏漏斗垫硅藻土过滤, 滤液蒸干, 用乙酸乙酯萃取, 有机相依次用饱和食盐水洗涤3次, 无水Na2SO4干燥, 浓缩蒸干, 经柱层析分离(洗脱剂: 甲醇/二氯甲烷, V∶V=1∶15)得到中间体4a~4m, 直接用于下一步反应.
3.2.4 中间体6的合成
将帕博西尼(22.4 mmol)、溴代乙酸乙酯(26.8 mmol)、碳酸钾(26.8 mmol)及DMF (50 mL)加入100 mL圆底烧瓶中, 室温搅拌过夜. 薄层层析(TLC)检测反应. 待反应完后, 用布氏漏斗先过滤掉碳酸钾固体, 滤液用乙酸乙酯萃取, 有机相依次用饱和食盐水洗涤3次, 无水Na2SO4干燥, 浓缩蒸干, 经柱层析分离(洗脱剂: 甲醇/二氯甲烷, V∶V=1∶15)得到中间体5, 直接用于下一步反应.
将得到的中间体5 (11.2 mmol)、氢氧化纳(22.4 mmol)、25 mL甲醇和25 mL水加入100 mL圆底烧瓶中, 室温搅拌过夜. TLC检测反应, 待反应完后, 用稀盐酸中和至pH值为中性. 过滤得到粗品, 晾干后, 经柱层析分离(洗脱剂: 甲醇/二氯甲烷, V∶V=1∶10)得到中间体6, 黄色固体, 产率70%. m.p. 170~172 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.59 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.88 (s, 2H), 2.24 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.74 (s, 4H), 3.21 (s, 6H), 5.79~5.84 (m, 1H), 7.47 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 10.12 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 25.6, 28.0, 31.8, 48.5, 52.2, 53.4, 59.2, 107.0, 115.6, 125.3, 129.7, 135.9, 142.6, 143.8, 144.8, 155.2, 158.7, 159.0, 161.2, 171.5, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C26H32- N7O4 [M＋H]＋ 506.2510, found 506.2506.
3.2.5 目标化合物7a~7n的合成
将中间体6 (1.0 mmol)、中间体4a~4m/来那度胺(1.0 mmol)、HATU (1.0 mmol)、二异丙基乙胺(3.0 mmol)及DMF (20 mL)加入100 mL圆底烧瓶瓶中, 在氮气保护下, 室温搅拌过夜, TLC检测反应, 待反应完后, 用乙酸乙酯萃取, 有机相依次用饱和食盐水洗涤3次, 无水Na2SO4干燥, 浓缩蒸干, 经柱层析分离(洗脱剂: 甲醇/二氯甲烷, V∶V=1∶15)得到目标化合物7a~7n.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-甲基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7a): 黄色固体, 产率52%. m.p. 234~235 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.59 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.88(s, 2H), 2.25 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.75 (s, 4H), 3.08 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 4.45 (s, 2H), 5.80~5.85 (m, 1H), 7.47 (d, J=4.1 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.82 (t, J=4.1 Hz, 1H), 7.86 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 10.10 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 25.6, 28.0, 29.4, 31.8, 48.8, 50.9, 52.9, 53.4, 61.7, 107.1, 115.6, 119.5, 125.2, 125.3, 128.9, 129.7, 133.5, 134.0, 134.1, 135.9, 142.6, 143.9, 144.8, 155.2, 158.7, 159.1, 161.2, 167.5, 168.7, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C35H40N9O4 [M＋H]＋ 650.3198, found 650.3187.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-乙基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7b): 黄色固体, 产率58%. m.p. 185~187 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.23 (s, 3H), 1.59 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.88 (s, 2H), 2.25 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.75 (s, 4H), 3.28 (s, 4H), 3.35 (s, 2H), 3.56 (dd, J=7.2, 14.4 Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 5.81~5.85 (m, 1H), 7.48 (d, J=4.0 Hz, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.83 (t, J=4.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 10.16 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 25.6, 28.0, 29.5, 31.8, 36.8, 48.3, 48.8, 52.9, 53.4, 61.7, 107.1, 115.7, 119.5, 125.2, 125.3, 128.9, 129.7, 133.6, 134.2, 135.9, 142.5, 143.9, 144.8, 155.2, 158.7, 159.1, 161.2, 167.1, 168.7, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C36H40N9O4 [M－H]－ 662.3209, found 662.3193.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-异丙基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7c): 黄色固体, 产率40%. m.p. 142~148 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.28 (d, J=11.6 Hz, 6H), 1.69~1.72 (m, 2H), 1.88~1.90 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 2.39 (s, 5H), 2.54 (s, 3H), 2.89 (t, J=4.4 Hz, 4H), 3.30 (s, 4H), 3.32 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.64~4.70 (m, 1H), 5.84~5.93 (m, 1H), 7.35 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 1H), 7.47 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 9.17 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 14.0, 20.9, 25.7, 28.1, 31.5, 42.8, 44.2, 49.9, 53.4, 54.1, 61.8, 107.7, 113.6, 120.7, 124.2, 126.1, 129.1, 130.8, 132.0, 132.8, 134.8, 136.6, 141.8, 143.0, 145.5, 155.5, 157.3, 158.1, 161.4, 167.4, 167.8, 202.6. HRMS (ESI) calcd for C37H42N9O4 [M－H]－ 676.3365, found 676.3348.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-异丁基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7d): 黄色固体, 产率58%. m.p. 93~195 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 0.96 (d, J=6.8 Hz, 6H), 1.68~1.71 (m, 2H), 1.89 (s, 2H), 2.07 (s, 2H), 2.04~2.08 (m, 2H), 2.38 (s, 5H), 2.55 (s, 3H), 2.88 (t, J=4.0 Hz, 4H), 3.29 (s, 4H), 3.30 (s, 2H), 3.43 (d, J=7.6 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 5.83~5.92 (m, 1H), 7.36 (dd, J=2.8, 9.2 Hz, 1H), 7.48 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J=8.8 Hz, 2H), 8.83 (s, 1H), 9.10 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 14.1, 20.1, 22.7, 25.7, 28.1, 31.9, 49.8, 53.4, 54.1, 61.8, 107.6, 113.8, 120.9, 124.2, 125.4, 126.3, 129.1, 130.1, 131.9, 132.6, 134.4, 136.4, 141.7, 143.1, 145.5, 155.6, 157.1, 158.0, 161.4, 167.8, 168.3, 202.5. HRMS (ESI) calcd for C38H44N9O4 [M－H]－ 690.3522, found 690.3518.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-叔丁基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7e): 黄色固体, 产率43%. m.p. 111~113 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.57 (s, 9H), 1.68~1.70 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 2.06~2.07 (m, 2H), 2.38 (s, 5H), 2.55 (s, 3H), 2.89 (s, 4H), 3.31 (s, 6H), 4.47 (s, 2H), 5.84~5.93 (m, 1H), 7.36 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.44 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.87 (d, J=2.4 Hz, 2H), 9.16 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 13.9, 25.8, 28.0, 28.1, 28.3, 29.7, 31.5, 47.3, 50.0, 53.4, 54.1, 54.5, 61.7, 107.9, 113.7, 120.2, 121.3, 123.8, 126.3, 129.0, 130.9, 131.7, 132.0, 135.8, 136.6, 141.7, 143.1, 145.5, 155.6, 157.1, 158.0, 161.4, 167.7, 168.3, 202.5. HRMS (ESI) calcd for C38H44N9O4 [M－H]－ 690.3522, found 690.3511.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-环戊基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7f): 黄色固体, 产率40%. m.p. 147~149 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.69~1.72 (m, 6H), 1.89~1.91 (m, 4H), 2.06~2.10 (m, 4H), 2.40 (s, 5H), 2.57 (s, 3H), 2.93 (s, 4H), 3.31 (d, J=5.2 Hz, 4H), 3.35 (s, 2H), 4.40 (s, 2H), 4.76~4.82 (m, 1H), 5.85~5.94 (m, 1H), 7.35~7.41 (m, 1H), 7.50 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J=8.0, 24.0 Hz, 1H), 8.07 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.24 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 9.20 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 14.0, 14.1, 22.7, 24.1, 25.8, 28.1, 29.4, 29.7, 30.2, 31.5, 31.9, 32.7, 37.1, 45.4, 49.9, 52.7, 53.4, 54.0, 61.7, 113.7, 120.7, 124.1, 129.1, 131.9, 132.6, 134.7, 141.7, 143.0, 155.5, 157.1, 161.4, 167.9, 202.6. HRMS (ESI) calcd for C39H46N9O4 [M＋H]＋ 704.3667, found 704.3657.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-正己基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7g): 黄色固体, 产率45%. m.p. 122~124 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 0.87 (t, J=6.4 Hz, 3H), 1.25~1.39 (m, 6H), 1.64~1.70 (m, 4H), 1.89 (d, J=4.8 Hz, 2H), 2.07 (s, 2H), 2.40 (s, 5H), 2.53 (s, 3H), 2.89 (s, 4H), 3.30 (s, 4H), 3.31 (s, 2H), 3.60 (t, J=7.2 Hz, 2H), 4.40 (s, 2H), 5.86~5.91 (m, 1H), 7.34 (dd, J=2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.46 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.07 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.94 (s, 1H), 9.17 (s, 2H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 13.9, 14.0, 22.5, 25.7, 26.5, 28.1, 28.4, 31.5, 42.5, 49.0, 49.7, 53.4, 54.1, 61.8, 107.6, 113.5, 120.7, 124.3, 126.0, 129.1, 130.7, 131.9, 132.8, 134.5, 136.4, 141.8, 143.0, 145.4, 155.5, 157.3, 158.1, 161.4, 167.8, 168.0, 202.7. HRMS (ESI) calcd for C40H50N9O4 [M＋H]＋ 720.3980, found 720.3997.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-环己基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7h): 黄色固体, 产率55%. m.p. 173~175 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.10~1.15 (m, 1H), 1.33~1.41 (m, 2H), 1.45~1.65 (m, 5H), 1.77 (s, 6H), 1.88 (s, 2H), 2.23~2.27 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.76 (s, 4H), 3.29 (s, 6H), 3.98~4.04 (m, 1H), 4.43 (s, 2H), 5.78~5.87(m, 1H), 7.45~7.52 (m, 3H), 7.81~7.85 (m, 1H), 7.87 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.09 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 10.14 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 25.5, 25.6, 25.7, 28.0, 31.3, 31.8, 45.3, 48.9, 50.7, 52.9, 53.4, 61.6, 107.0, 115.6, 119.4, 125.2, 128.9, 129.7, 133.6, 134.3, 135.9, 142.6, 143.9, 144.8, 155.2, 158.7, 159.0, 161.2, 166.8, 168.7, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C40H48N9O4 [M＋H]＋ 718.3824, found 718.3842.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(2-吡喃基-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7i): 橙色固体, 产率60%. m.p. 170~172 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.58~1.88 (m, 10H), 2.23~2.27 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.76 (s, 4H), 3.29 (s, 6H), 3.46 (t, J=10.0 Hz, 2H), 3.95 (dd, J=3.7, 14.8 Hz, 2H), 4.24~4.31 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 5.79~5.87 (m, 1H), 7.47~7.52 (m, 3H), 7.83~7.89 (m, 2H), 8.09 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 10.13 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 25.6, 28.0, 31.2, 31.8, 45.5, 48.2, 48.8, 53.0, 53.4, 61.6, 66.8, 107.0, 115.7, 119.4, 125.2, 129.0, 129.7, 133.7, 134.1, 134.3, 135.9, 142.6, 143.9, 144.8, 155.2, 158.7, 159.0, 161.2, 167.0, 168.8, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C39H46N9O5 [M＋H]＋ 720.3616, found 720.3630.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-[1-酮-2-(3-甲基苯基)-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基]-乙酰胺(7j): 黄色固体, 产率58%. m.p. 287~289 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.58 (s, 2H), 1.71~1.72 (m, 2H), 1.91 (m, 2H), 2.07~2.11 (m, 2H), 2.40 (s, 6H), 2.58 (s, 3H), 2.95 (s, 4H), 3.35 (s, 4H), 3.38 (s, 2H), 4.91 (s, 2H), 5.86~5.92 (m, 1H), 7.02 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.32 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=4.0, 8.0 Hz, 1H), 7.54 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.80 (d, J=7.6 Hz, 2H), 8.08 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 9.28 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 14.0, 21.7, 22.7, 25.8, 28.1, 29.7, 31.5, 31.9, 50.0, 50.1, 53.4, 61.7, 107.0, 116.9, 120.5, 121.2, 124.9, 125.0, 125.6, 129.4, 129.5, 131.9, 134.7, 139.1, 141.5, 143.1, 155.5, 158.8, 161.4, 165.6, 167.9, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C41H44N9O4 [M＋H]＋ 726.3511, found 726.3494.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-[1-酮-2-(4-氟苯基)-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基]-乙酰胺(7k): 黄色固体, 产率65%. m.p. 160~162 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.68~1.71 (m, 2H), 1.89 (s, 2H), 2.05 (s, 2H), 2.36 (s, 5H), 2.54 (s, 3H), 2.90 (t, J=4.4 Hz, 4H), 3.30 (s, 4H), 3.33 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 5.88~5.93 (m, 1H), 7.09 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.35 (dd, J=2.8, 9.2 Hz, 1H), 7.51 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.76~7.81 (m, 3H), 8.08 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 9.25 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 13.9, 25.8, 28.1, 29.7, 31.5, 49.9, 50.4, 53.4, 54.1, 61.7, 107.8, 113.6, 115.7 (d, J=22.3 Hz), 121.5 (t, J=7.8 Hz), 125.2, 126.2, 129.5, 130.8, 132.0 (d, J=11.1 Hz), 134.5, 135.3 (d, J=2.7 Hz), 136.6, 141.7, 143.0, 145.5, 155.5, 157.2, 158.0, 158.4, 160.9, 161.4, 166.8, 167.9, 202.6. HRMS (ESI) calcd for C40H39FN9O4 [M－H]－ 728.3115, found 728.3148.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-[1-酮-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基]-乙酰胺(7l): 橙色固体, 产率63%. m.p. 245~247 ℃; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 1.69~171 (m, 2H), 1.89 (s, 2H), 2.06~2.07 (m, 2H), 2.38 (s, 5H), 2.56 (s, 3H), 2.92 (t, J=4.4 Hz, 4H), 3.32 (s, 4H), 3.34 (s, 2H), 3.83 (s, 9H), 4.86 (s, 2H), 5.84~5.93 (m, 1H), 7.11 (s, 2H), 7.36 (dd, J=2.8, 9.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.23 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 9.28 (s, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ: 14.0, 14.1, 22.7, 25.8, 28.1, 29.7, 31.5, 50.0, 50.3, 53.4, 54.0, 56.2, 61.0, 61.7, 98.0, 107.0, 113.6, 121.0, 124.8, 126.2, 129.6, 131.4, 131.9, 134.5, 135.2, 136.4, 141.7, 142.9, 153.5, 155.5, 157.2, 161.4, 167.0, 167.9, 202.5. HRMS (ESI) calcd for C43H48N9O7 [M＋H]＋ 802.3671, found 802.3627.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-(1-酮-2-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基)-乙酰胺(7m): 黄色固体, 产率60%. m.p. 314~316 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.58 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.88 (s, 2H), 2.25 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.79 (s, 4H), 3.29 (s, 6H), 5.12 (s, 2H), 5.81~5.85 (m, 1H), 7.21 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.51~7.58 (m, 2H), 7.63 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.90 (dd, J=9.2, 12.4 Hz, 2H), 7.97 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.10 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J=4.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 10.14 (s, 1H). HRMS (ESI) calcd for C39H39N10O4 [M－H]－ 711.3161, found 711.3147.
2-{4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-酮-7,8-二氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-基}-N-[2-(2, 6-二酮-3-哌啶基)-1-酮-2,3-二氢-1H-异吲哚酮-4-基]-乙酰胺(7n): 黄色固体, 产率60%. m.p. 196~198 ℃; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 1.58~1.59 (m, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.88 (s, 2H), 2.02~2.04 (m, 1H), 2.25 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.59 (s, 2H), 2.74 (s, 4H), 3.27 (s, 4H), 4.41 (dd, J=17.2, 25.2 Hz, 2H), 5.13 (dd, J=5.2, 13.2 Hz, 1H), 5.81~5.87 (m, 1H), 7.48~7.57 (m, 3H), 7.81 (d, J=6.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.07 (dd, J=2.8, 7.6 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 11.02 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6, 101 MHz) δ: 14.1, 23.0, 25.6, 28.0, 31.8, 48.7, 52.5, 53.0, 53.4, 61.6, 107.0, 115.7, 119.9, 125.2, 129.1, 129.7, 133.2, 134.2, 135.1, 135.9, 142.6, 143.9, 155.2, 158.7, 159.0, 161.2, 168.2, 168.7, 171.5, 173.3, 202.9. HRMS (ESI) calcd for C39H43N10O6 [M＋H]＋ 747.3362, found 747.3381.
辅助材料(Supporting Information) 化合物3a~3m、6和7a~7n的1H NMR、13C NMR和HRMS谱图. 这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.
(Lu, Y.)