固定化乙酰胆碱酯酶的制备及其特性研究

doi:10.6023/A1107232

化学学报 ›› 2012, Vol. 0 ›› Issue (05): 624-628 .DOI: 10.6023/A1107232 上一篇下一篇

研究论文

固定化乙酰胆碱酯酶的制备及其特性研究

陈军辉^a, 史倩^a, 陈晨^a,c, 李鑫^a, 曹为^a, 郑立^a, 王小如^a,b

a 国家海洋局第一海洋研究所海洋生态研究中心青岛 266061;
b 厦门大学化学化工学院厦门 361005;
c 上海海洋大学水产与生命学院上海 201306

投稿日期:2011-07-23 修回日期:2011-11-22 发布日期:2011-12-09
通讯作者: 陈军辉 E-mail:jhchen@fio.org.cn
基金资助:
国家自然科学基金(No. 20905017)、国家海洋局青年基金(No. 2010140)和海洋一所基本科研业务专项(No. 2010G25)资助项目.

Preparation and Characteristic Research of Immobilized Acetylcholinesterase

Chen Junhui^a, Shi Qian^a, Chen Chen^a,c, Li Xin^a, Cao Wei^a, Zheng Li^a, Wang Xiaoru^a,b

a Research Center for Marine Ecology, The First Institute of Oceanography, State Oceanic Administration, Qingdao 266061;
b College of Chemistry and Chemical Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005;
c College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306

Received:2011-07-23 Revised:2011-11-22 Published:2011-12-09
Supported by:
Project supported by the National Natural Scientific Foundation of China (No. 20905017), the Science Foundation for Youth Scholars of State Oceanic Administration (No. 2010140) and the Primary Scientific Foundation of the First Institute of Oceanography (No. 2010G25).

文章分享

摘要/Abstract

本研究以期研制出能重复使用的固定化乙酰胆碱酯酶(AChE), 为天然产物复杂体系中AchE 抑制剂筛选新方法的发展奠定基础. 以氨基化硅胶(APS-Si)微球为载体, 戊二醛为交联剂对乙酰胆碱酯酶进行交联固定化, 并研究了酶的最佳固定化条件和固定化酶的性质. 结果表明, 0.05 g 氨基化硅胶微球载体, 用戊二醛溶液活化6 h 后, 在给酶量5 U, 28℃固定16 h 条件下, 得到固定化酶的活性最大. 固定化酶在常温(20～40 ℃), 以及较宽pH 范围内(pH 6～10)均具有较高的活性, 并且具有良好的保存稳定性和可重复利用率, 为基于固定化靶酶亲和-色谱质谱联用分析快速筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂新方法的发展奠定了基础.

关键词: 乙酰胆碱酯酶, 固定化酶, 亲和分离材料, 氨基化硅胶

A new method for preparation of a reusable immobilized acetylcholinesterase (AchE) was developed in order to lay a foundation for screening AchE inhibitors from natural products. AchE was immobilized on aminated silica gel microspheres with glutaraldehyde as cross-linking reagent. The optimum conditions and properties of immobilized enzyme were investigated. The optimal immobilization process was as follows: 0.05 g of aminated silica gel microspheres was activated by glutaraldehyde solution for 6 h, and mixed with AChE solution with the activity of 5 U. Then, the mixture was shook for 16 h at 28 . ℃ The immobilized enzyme produced by this method had the highest enzyme activity, and it could remain better activity with a wide range of pH (pH 6～10) at room temperature (20～40 ℃). The immobilized AChE showed higher storage stability and could be used repeatedly.

Key words: acetylcholinesterase, immobilized enzyme, affinity separation material, aminated silica gel

引用此文

陈军辉, 史倩, 陈晨, 李鑫, 曹为, 郑立, 王小如. 固定化乙酰胆碱酯酶的制备及其特性研究[J]. 化学学报, 2012, 0(05): 624-628 .

Chen Junhui, Shi Qian, Chen Chen, Li Xin, Cao Wei, Zheng Li, Wang Xiaoru. Preparation and Characteristic Research of Immobilized Acetylcholinesterase[J]. Acta Chimica Sinica, 2012, 0(05): 624-628 .

导出引用 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

分享此文

参考文献

1 Slon-Usakiewicz, J. J.; Ng, W.; Dai, J. R.; Pasternak, A.; Redden, P. R. Drug Discovery Today 2005, 10(6), 409.

2 Espada, A.; Molina-Martin, M.; Dage, J.; Kuo, M. S. Drug Discovery Today 2008, 13(9～10), 417.

3 Slon-Usakiewicz, J. J.; Dai, J. R.; Ng, W.; Foster, J. E.; Deretey, E.; Toledo-Sherman, L.; Redden, P. R.; Pasternak, A.; Reid, N. Anal. Chem. 2005, 77(5), 1268.

4 Jin, N.-Z.; Lu, X.-H. Chin. J. Biochem. Pharm. 2003, 24(5), 1 (in Chinese). (金念祖, 陆晓和, 中国生化药物杂志, 2003, 24(5), 1.)

5 Huang, X. D.; Kong, L.; Li, X.; Chen, X. G.; Guo, M.; Zou, H. F. J. Chromatogr. B 2004, 812, 71.

6 Wang, S.; Sun, M.; Zhang, Y. M.; Du, H.; He, L. C. J. Chromatogr. A 2010, 1217(32), 5246.

7 Xin, G. Z.; Zhou, J. L.; Qi, L. W.; Li, P. Comb. Chem. High Throughput Screening 2011, 14(2), 93.

8 Huang, Y.; Tian, Q.-Q.; Li, T.-Y.; Chen, B.; Yao, S. Z. Sci. China, Ser. B: Chem. 2009, 39(8), 760 (in Chinese). (黄燕, 田清清, 李谭瑶, 陈波, 姚守拙, 中国科学B 辑: 化学, 2009, 39(8), 760.)

9 Tang, Z. M.; Wang, Z. Y.; Kang, J. W. Electrophoresis 2007,28, 360.

10 Hu, F. L.; Zhang, H. Y.; Lin, H. Q.; Deng, C. H.; Zhang, X. M. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2008, 19, 865.

11 Hu, F. L.; Deng, C. H.; Zhang, X. M. J. Chromatogr. B2008, 871, 67.

12 Rhee, I. K.; van de Meent, M.; Ingkaninan, K.; Verpoorte, R. J. Chromatogr. A 2001, 915(1～2), 217.

13 Zhang, X.-A.; Jia, H.-H.; Wang, X.-F.; Zhang, H.-L.; Yin, H.-W.; Chang, S.-L.; Wang, J.-F.; Wu, W.-J. Chin. Sci. Bull.2009, 54(12), 1701 (in Chinese). (张学骜, 贾红辉, 王晓峰, 张海良, 尹红伟, 常胜利, 王建方, 吴文健, 科学通报, 2009, 54(12), 1701.)

14 Marinov, I.; Gabrovska, K.; Velichkova, J.; Godjevargova, T. Int. J. Biol. Macromol. 2009, 44(4), 338.

15 Ellman, G. L.; Courtney, K. D.; Andres, V. Jr.; Feather-stone, R. M. Biochem. Pharmacol. 1961, 7, 88.

16 Zhang, A.-J.; Meng, F.-P. Polym. Mater. Sci. Eng. 2011,27(4), 124 (in Chinese). (张爱静, 孟范平, 高分子材料科学与工程, 2011, 27(4),124.)

17 Tumturk, H.; Sahin, F.; Demirel, G. Bioprocess Biosyst. Eng. 2007, 30, 141.

18 Li, Y. R.; Gan, Z. Y.; Li, Y. F.; Liu, Q.; Bao, J. C.; Dai, Z. H.; Han, M. Sci. China Chem. 2010, 53(4), 820.

[1]	高丰琴, 刘洋, 张引莉, 蒋育澄. 羧基功能化Fe₃O₄固定化酶反应器的构筑及性能研究[J]. 化学学报, 2023, 81(4): 338-344.
[2]	高霞, 潘会宾, 贺曾贤, 杨柯, 乔成芳, 刘永亮, 周春生. Al-MOF基多级孔Al₂O₃固定化酶反应器的构筑及构效关系研究[J]. 化学学报, 2021, 79(12): 1502-1510.
[3]	赵睿南, 胡满成, 李淑妮, 翟全国, 蒋育澄. 基于金属有机骨架的固定化氯过氧化物酶的制备和性能评价[J]. 化学学报, 2017, 75(3): 293-299.
[4]	王琴, 聂舟, 胡宇芳, 姚守拙. 基于铜-巯基配位聚合物电化学催化的新型乙酰胆碱酯酶电化学传感器[J]. 化学学报, 2017, 75(11): 1109-1114.
[5]	张灿, 张金星, 王坤, 戴志晖. 纳米SnSe₂ 空心球上乙酰胆碱酯酶的固定及辛硫磷传感器的构建[J]. 化学学报, 2012, 70(08): 1008-1012.
[6]	赵海泉, 洪法水. 纳米氧化钛与小鼠乙酰胆碱酯酶的作用关系[J]. 化学学报, 2011, 69(03): 298-304.
[7]	王华,王安明,周成,祝社民,宗璟,沈树宝. 微波辐射高效共价固定青霉素酰化酶[J]. 化学学报, 2008, 66(2): 271-275.
[8]	杜为红^T,,, 李医明^T,,, 甘秋玲, 蒋山好, 谭昌恒^,朱大元. 应用¹H NMR弛豫观察石杉碱戊与乙酰胆碱酯酶的结合[J]. 化学学报, 2007, 65(5): 415-420.
[9]	闵红,曲云鹤,李晓华,谢宗红,卫银银,金利通. Au掺杂Fe₃O₄纳米粒子酶传感器的制备及其应用于有机磷农药检测的研究[J]. 化学学报, 2007, 65(20): 2303-2308.
[10]	张君,王月伶,袁倬斌. 可检测有机磷农药残留的丝网印刷酶电极[J]. 化学学报, 2006, 64(5): 428-434.
[11]	谢修银, 汪存信, 王志勇^{. SDS抑制乙酰胆碱酯酶反应的热动力学研究[J]. 化学学报, 2006, 64(21): 2151-2156.}
[12]	郭丽,张凌之,吕子敏,徐正. 固定化酶催化合成CCK-8C-端三肽衍生物[J]. 化学学报, 2003, 61(3): 406-410.
[13]	郭刚军,马林,毛学圃,古练权,王骏. 新型芳香胺－邻醌聚合物的合成及其作为纳料固定化酶载体的研究[J]. 化学学报, 2002, 60(3): 499-503.
[14]	任汀菱,唐芳琼. 超细银－金复合颗粒增强酶生物传感器的研究[J]. 化学学报, 2002, 60(3): 393-397.
[15]	周国伟,李干佐,李越中,徐健,王仁会,李传光. 微乳液和微乳液凝胶中脂肪酶催化的酯合成反应[J]. 化学学报, 2001, 59(3): 344-349.

固定化乙酰胆碱酯酶的制备及其特性研究

Preparation and Characteristic Research of Immobilized Acetylcholinesterase

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用此文

分享此文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

相关统计

本文评价