化学学报 ›› 2009, Vol. 67 ›› Issue (2): 162-166. 上一篇 下一篇
研究论文
龚福春*,a 唐连飞b 郑兴良a 曹 忠a 谭淑珍a 谭亚非a
(a长沙理工大学化学与生物工程学院 长沙 410076)
(b湖南省出入境检验检疫局 长沙 410004)
Gong, Fuchun *,a Tang, Lianfei b Zheng, XinglLiang a Cao, Zhong a
Tan, Shuzhen a Tan, Yafei a
(a College of Chemistry and Environmental Engineering, Changsha University of Science and Technology, Changsha 410076)
(b Hunan Exit-Entry Inspection and Quarantine Bureau, Changsha 410004)
以4-甲氧基-N-(2-N’,N’-二甲基氨基乙基-N’-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵(DMNAA)为荧光单体, 合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺-4-甲氧基-N-(2-N’,N’-二甲基氨基乙基-N’-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵-N,N-二甲基氨丙基甲基丙烯酰胺[P(NIP-DMAPM-DMNAA)]. 采用共聚法将日本血吸虫抗原(SjAg)固定在P(NIP-DMAPM-DMNAA)上, 制备P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg连接物, 与日本血吸虫抗体(待测, SjAb)发生免疫反应后, 调节pH值, 使荧光高分子相变分离高分子-免疫组分连接物, 最后, 利用蛋白A对抗体的亲和性捕获P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg-SjAb, 通过测定高分子自身的荧光信号来定量 SjAb. 该新型高分子具有良好的荧光特性, 对pH响应快速, 37 ℃下相转变pH值为7.2, 分离免疫复合物时造成的损害低. 与传统相分离免疫分析比较, 新方法通过高分子相变分离和蛋白A捕获双重分离作用, 消除了非特异性组分和未反应的特异性免疫成分等的干扰; 利用高分子自身的荧光信号检测, 无须另外的标记物, 大大提高了免疫分析的简便性. 以日本血吸虫抗体为分析对象, 测得线性范围为1~1500 ng/mL, 抗体检出限为1.3 ng/mL, 相对标准偏差为3.6% (n=10), 结果令人满意.