姜花属(Hedychium)植物是姜科(Zingiberaceae)的一个分布广泛的属, 包含50余种植物, 是姜科中仅有的热带到高海拔地区均有分布的属[1]. 姜花属多种植物均可入药, 在民间黄白姜花以根茎入药, 具有发汗解表、利湿消肿的功效, 用于治疗风寒感冒和水肿等病症[2]. 姜花的根茎又称土羌活, 可发汗解表、祛风除寒, 用于治疗发热、胃痛和风湿疼痛等症状[3]. 其中草果药(Hedychium spicatum (Ham. Ex Smith))主要分布于我国西南地区[2]. 草果药具有悠久的用药历史, 始载于《滇南本草》, 其味辛、微苦和性温, 具有宽中散寒、理气消食的功效, 可用于治疗胃寒脘腹疼痛、食积腹胀和寒疝腹痛[4]. 现代科学研究表明, 草果药根茎中含有丰富的化学成分, 包括挥发油类[5-9], 其主要成分为1,8-桉树脑、芳樟醇和β-蒎烯等. Reddy等[10-12]于2009年先后从草果药根茎提取物中分离得到15个二萜化合物, 均为半日花烷型骨架, 包括6个新化合物: hedychilactone D, 9-hydroxy hedychenone, 7-hydroxy hedichinal, spicatanoic acid, spicatanol和spicatanol methyl ether和9个已知二萜类化合物. Suresh等[13]于2013年分离得到19个倍半萜, 骨架涉及桉烷型、石竹烷型和金合欢烷型等, 并包括6个新化合物以及13个已知倍半萜. 药理学研究表明, 草果药根茎的提取物或从中分离获得的单体化合物具有抗癌[10]、降血糖[12]、抗菌[14]、抗氧化[15]、抗炎[16]、镇痛[16]和抗胃溃疡[16]等生物学作用.
本课题组长期致力于从植物中研究开发天然来源的神经保护剂, 研究表明神经退行性疾病的发生与发展都与炎症或氧化应激密切相关[19-23]. 研究表明松香烷型二萜成分具有良好的抗神经炎症活性[19-20], 具有α,β不饱和酮结构片段的倍半萜具有良好的抗氧化应激损伤的作用[21]. 前期对草果药根茎的提取物进行液相色谱-质谱联用分析, 表明其含有丰富的二萜类成分, 但关于该类型二萜的研究报道较少, 目前仅分离得到10余种二萜成分. 查阅文献发现包括姜花酮在内的多种二萜成分均含有α,β不饱和酮结构片段, 表明该类二萜成分可能通过缓解炎症或氧化应激而发挥神经保护作用. 因此我们选择草果药为研究对象, 挖掘其具有抗神经炎症作用的二萜类成分. 本工作从草果药根茎中分离鉴定4个降半日花烷型二萜, 包括2个新化合物(图 1), 并利用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的神经小胶质细胞(BV2)模型评论其抗神经炎症作用. 在此报道这些化合物的提取分离和结构鉴定过程及抗神经炎症作用.
1 结果与讨论
化合物1为无色油状物, 易溶于甲醇. HR-ESI-MS显示分子式为C18H24O3 (calcd for C18H25O3 [M＋H]＋289.1798, found 289.1798), 不饱和度为7, 推测该化合物为降两个碳的二萜类化合物. 1H NMR谱(表1)显示, 在低场区有2个烯烃质子信号δH 7.30 (d, J=16.4 Hz, 1H, H-11)和6.26 (d, J=16.4 Hz, 1H, H-12), 高场区显示有5个甲基质子信号δH 2.36 (s, 3H, H-14), 2.00 (s, 3H, H-17), 1.48 (s, 3H, H-20)和1.39 (s, 6H, H-18/19). 13C NMR (DEPT)谱(表1)显示共有18个碳信号, 包括5个甲基、3个亚甲基、2个次甲基和8个季碳, 包括一对烯烃次甲基信号δC 139.6和134.6, 4个烯烃季碳信号δC 160.3、141.7、143.8和128.4, 以及2个羰基信号δC 197.4和δC 181.5. 通过HSQC图谱确定各碳原子和质子之间的对应关系. 1H-1H COSY图谱显示两个片段, 分别为H-2与H-1、H-3相关以及H-11与H-12相关. HMBC图谱中, CH3-18/19与C-3、C-4和C-5相关, CH3-20与C-1、C-5、C-9和C-10相关, CH3-17与C-7、C-8和C-9相关, 可以确定半日花烷型二萜的A环和B环的固定结构片段以及4个甲基的连接位置(图2). 此外还检测到6-OH质子信号与C-5、C-6和C-7相关, 说明羟基与C-6位置连接, 致使C-6化学位移向低场区移动至δC 143.8, 也验证C-7为酮羰基, 化学位移为δC 181.5. 以上信息说明C-5和C-6之间, C-8和C-9之间分别以碳碳双键连接. 最后, 烯烃质子δH 7.30 (H-11)与羰基信号δC 197.4存在HMBC相关, 烯烃质子δH 6.26 (H-12)与C-9和甲基碳信号δC 28.4存在HMBC相关, 说明C-11和C-12之间为烯烃双键, 并且H-11和H-12的偶合常数较大(J=16.4 Hz), 证明该双键为E构型; C-13为羰基取代, 甲基(C-14)直接与羰基相连, 最终确定半日花烷型二萜C-9位侧链的结构片段. 因此化合物1应为C-15和C-16降解的降半日花烷型二萜. 半日花烷型二萜的CH3-20一般位于β位置, ROESY谱中观察到CH3-19与CH3-20的相关信号(图2), 进一步通过计算电子圆二色谱(ECD)的方式确定其绝对构型为10R(图3). 因此化合物1被鉴定为(10R,11E)-6-羟基-15,16-二降-半日花烷-5,8,11-三烯-7,13-二酮[(10R,11E)-6-hydroxy-15,16-bisnor-labda-5,8,11-triene-7,13-dione].
表1 化合物1和2的核磁共振氢谱和碳谱数据Table 1 1H NMR and 13C NMR data of compounds 1 and 2 |
| Position | Compound 1 | Compound 2 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| δH (J in Hz)a | δCb | δH (J in Hz)a | δCb | ||
| 1 | 1.91~1.78 (m); 1.53~1.49 (m) | 32.0 (CH2) | 1.22~1.17 (m); 1.56~1.47 (m) | 40.2 (CH2) | |
| 2 | 1.74~1.62 (m); 1.91~1.78 (m) | 17.4 (CH2) | 1.44~1.38 (m); 1.56~1.47 (m) | 18.1 (CH2) | |
| 3 | 1.43~1.40 (m); 1.91~1.78 (m) | 37.5 (CH2) | 1.12 (overlapped); 1.38~1.34 (m) | 43.2 (CH2) | |
| 4 | — | 36.0 (C) | — | 32.6 (C) | |
| 5 | — | 141.7 (C) | 2.04 (s) | 63.2 (CH) | |
| 6 | — | 143.8 (C) | — | 199.4 (C) | |
| 7 | — | 181.5 (C) | 5.85 (s) | 128.7 (CH) | |
| 8 | — | 128.4 (C) | — | 154.6 (C) | |
| 9 | — | 160.3 (C) | 2.98 (d, J=10.9) | 60.1 (CH) | |
| 10 | — | 42.7 (C) | — | 42.8 (C) | |
| 11 | 7.30 (d, 16.4) | 139.6 (CH) | 6.80 (dd, J=15.5/10.8) | 145.4 (CH) | |
| 12 | 6.26 (d, 16.4) | 134.6 (CH) | 5.95 (d, J=15.5) | 126.0 (CH) | |
| 13 | — | 197.4 (C) | — | 166.0 (C) | |
| 14 | 2.36 (s) | 28.4 (CH3) | — | — | |
| 17 | 2.00 (s) | 13.5 (CH3) | 1.73 (s) | 22.9 (CH3) | |
| 18 | 1.39 (s) | 28.2 (CH3) | 1.11 (s) | 33.6 (CH3) | |
| 19 | 1.39 (s) | 27.7 (CH3) | 1.15 (s) | 21.7 (CH3) | |
| 20 | 1.48 (s) | 30.2 (CH3) | 0.96 (s), | 15.9 (CH3) | |
| 6-OH | 6.94 (s) | — | — | — | |
| -OCH3 | — | — | 3.74 (s) | 51.8 (CH3) | |
a 1H NMR data measured in 600 MHz, CDCl3. b 13C NMR data measured in 150 MHz, CDCl3. |
化合物2为浅黄色油状物, 易溶于甲醇. HR-ESI-MS显示分子式为 C18H26O3 (calcd for C18H27O3 [M＋H]＋ 291.1955, found 291.1963), 不饱和度为6. 1H NMR谱(表1)显示, 在低场区有3个烯烃质子信号δH 6.80 (dd, J=15.5/10.8 Hz, 1H, H-11)、5.95 (d, J=15.5 Hz, 1H, H-12)和5.85 (s, 1H, H-7), 高场区显示有4个甲基质子信号δH 1.73 (s, 3H, H-17), 1.15 (s, 3H, H-19), 1.11 (s, 3H, H-18)和0.96 (s, 3H, H-20). 13C NMR (DEPT)谱(表 1)显示共有18个碳信号, 分别为5个甲基、3个亚甲基、5个次甲基和5个季碳, 包括1个甲氧基信号δC 51.8, 3个烯烃次甲基信号δC 145.4、128.7和126.0, 1个烯烃季碳信号δC 154.6, 以及1个羰基信号δC 199.4和1个羧基或酯基碳信号δC 166.0. 1H-1H COSY数据显示两组自旋体系, 分别是H2-1/H2-2/H2-3以及H-11/H-12, 提示该化合物可能为半日花烷型二萜类化合物. 针对半日花烷二萜骨架的关键碳信号以及关键位点的二维图谱相关情况, 将化合物2的核磁数据与spicatanoic acid[11]进行对比, 发现化合物2多了一个甲氧基. HMBC图谱显示, 该甲氧基的质子信号与C-13位置的羧基碳相关, 其他二维核磁信号与spicatanoic acid一致, 由此可确定化合物2为spicatanoic acid的甲酯(图2). 根据生源途径的类似性, ROESY谱中H-5/H-9/CH3-18、H-11/CH3-19/CH3-20的相关性(图2)以及计算ECD的结果(图3), 将化合物2的绝对构型确定为5S,9S,10R. 故化合物2被鉴定为(5S,9S,10R,11E)-14,15,16-三降-半日花烷-7,11-二烯-6-酮-13-羧酸甲酯[(5S,9S,10R,11E)-14,15,16-trinor-labda-7,11-diene-6-one-13-acid methyl ester].
2个已知的降半日花烷型二萜化合物通过波谱数据和文献对照, 分别鉴定为(11E)-15,16-二降-半日花烷-7,11-二烯-6,13-二酮[(11E)-15,16-bisnor-labda-7,11-diene-6,13-dione, 3][24], (11E)-6α-羟基-15,16-二降-半日花烷-8(17),11-二烯-13-酮[(11E)-6α-hydroxy-15,16-bisnor-labda-8(17),11-diene-13-one, 4][25]. 采用LPS诱导神经小胶质细胞模型, 通过检测一氧化氮(NO)水平评价化合物1~4的抗神经炎症作用. 为评价化合物对BV2细胞的毒性, 首先在正常细胞中给予化合物1~4, 化合物 1~4未对BV2细胞产生毒性(图4A), 说明BV2细胞适宜用于评价这些化合物的抗神经炎症作用. BV2细胞经LPS损伤造模后, 以米诺环素(minocycline, MINO)为阳性对照药物, 浓度10 μmol/L, 测试化合物1~4对NO生成的影响, 发现4个化合物均能够抑LPS诱导的NO生成, 表现出明显的抗神经炎症作用(图4B); 测得化合物1~4抑制NO生成的IC50值分别为(17.12±5.59), (28.66±7.82), (22.24±8.02)和(16.81±5.62) μmol/L(表2), 其中化合物1和4的IC50值与阳性对照药米诺环素[IC50=(16.26±4.97) μmol/L]相当.
图4 化合物1~4对BV2的细胞毒性(a)和NO抑制活性(b)Figure 4 Cell viability rates (a) and NO concentrations of BV2 cells (b) after treated with compounds 1~4 means±SD, n=4; ###P<0.001 vs Control, *P<0.1, **P<0.01, ***P<0.001 vs LPS group. |
表2 化合物1~4的IC50值aTable 2 IC50 values of compounds 1~4 |
| Compound | IC50a/(μmol•L－1) |
|---|---|
| 1 | 17.12±5.59 |
| 2 | 28.66±7.82 |
| 3 | 22.24±8.02 |
| 4 | 16.81±5.62 |
| MINOb | 16.26±4.97 |
a Means±SD, n=4. b Positive drug. |
2 结果与结论
在我国, 草果药在民间具有悠久的药用历史; 在印度, 草果药也被称为“刺姜百合”(ban hald或kapur kachari), 具有较高的药用和食用价值, 是当地重要经济作物之一[26]. 2006年至今, 现代学者对该植物研究不断加深, 但多集中于研究其挥发油的药理学作用, 对其非挥发性化学成分及其药理作用研究较少. 本文对草果药的非挥发性成分展开研究, 获得4个降半日花烷型二萜类成分, 其中化合物1和2为新的降二碳或降三碳的半日花烷型二萜. 抗神经炎症测试结果表明所有化合物在测试浓度下均表现出抗神经炎症作用, 能够抑制LPS诱导的BV2细胞中NO的生成.
3 实验部分
3.1 仪器与试剂
Bruker III-600型超导核磁共振波谱仪(德国Bruker公司), Jascomodel 1020旋光仪(日本Horiba公司), UV-2401紫外光谱仪(日本岛津公司), G6530 LCMS-Q-TOF质谱仪(美国安捷伦科技有限公司), NICOLET iS10型红外光谱仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司], 圆二色谱仪(英国应用光物理公司), NU3000 serials 制备型高压液相色谱仪(江苏汉邦科技有限公司), LC-52型半制备型高效液相色谱仪(北京赛谱锐思科技有限公司), ELX-800酶标仪(美国宝特公司), ME204E型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司). 柱色谱用硅胶(200~300目)和GF254薄层色谱板购买自青岛海洋化工有限公司, 反相C-18柱色谱填料购买自北京赛谱锐思科技有限公司, CHP-20P GEL型微孔树脂(MCI)购买自日本三菱化学公司, Sephadex LH-20凝聚购买自瑞典Pharmacia 公司, DMEM/F12培养基购买自由北京伊诺凯有限公司, 胎牛血清(FBS)购买自上海逍鹏生物科技有限公司, CCK8试剂盒购买自上海泰坦科技股份有限公司, SY5Y人多巴胺能神经母瘤细胞株来自中国科学院昆明动物研究所. 氘代试剂购买自北京伊诺凯有限公司, 色谱纯乙腈购买自德国默克公司, 常用分析纯化学试剂购自云南利妍科技有限公司. 显色方法为用体积分数为10%的硫酸-乙醇溶液加热后显色.
3.2 植物材料
草果药于2022年10月采自云南腾冲, 经云南中医药大学张荣平教授鉴定为姜科姜花属植物草果药Hedychium spicatum的根茎, 样品(No. 20221031)保存于云南中医药大学中药学院暨云南省南药可持续利用研究重点实验室.
3.3 提取与分离
干燥草果药根茎28 kg, 粉碎后加入150 L甲醇, 室温浸泡3 d, 纱布过滤, 重复3次, 合并上述滤液, 减压浓缩得浸膏1.9 kg. 将草果药甲醇提取物分散于水中, 用3倍量乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部分1.1 kg. 采用中压MCI gel CHP 20P [2 kg, 15 cm×60 cm, 甲醇/水(V∶V=30∶70、50∶50、70∶30、90∶10、100∶0)]洗脱得6个组分Fr.1~Fr.6. 液相色谱-质谱联用分析表明, 第四流分及第五流分富含二萜类成分Fr.4 (228 g)采用硅胶柱色谱[1.2 kg, 12 cm×100 cm, 石油醚/乙酸乙酯(V∶V=50∶1、30∶1、15∶1、10∶1、8∶1、8∶2、7∶3)]进行下一步分离, 最终合并为6个流分Fr.4-1~Fr.4-6. 然后对Fr.4-3进行下一步分离, 由于在硫酸乙醇显色下, Fr.4-3斑点不明显且分离度较差, 故采用中压柱色谱[RP-18, 甲醇/水(V∶V=30∶70、50∶50、70∶30、90∶10、100∶0)]进行分离, 得到9个流分Fr.4-3-1~Fr.4-3-9. Fr.4-3-5经过Sephadex LH-20凝胶柱色谱, 以甲醇洗脱后得到4个流分Fr.4-3-5-1~Fr.4-3-5-4, 其中, Fr.4-3-5-3经硅胶柱色谱和制备薄层色谱板(石油醚/乙酸乙酯, V∶V=8∶2)分离纯化得到化合物1 (3.1 mg), Fr.4-3-5-2经过Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC (YMC-ODS柱, 质量分数为35%的乙腈-水, 3 mL/min, λ=201/254 nm)得化合物3 (tR=36.0 min, 68 mg)和化合物4 (tR=38.5 min, 3 mg). Fr.5 (300 g)采用硅胶柱色谱[2.0 kg, 12 cm×150 cm, 石油醚/乙酸乙酯(V∶V=200∶1、100∶1、50∶1、30∶1、10∶1、8∶2、7∶3, V∶V)]进行下一步分离, 最终合并为5个流分Fr.5-1~Fr.5-5, 并对Fr.5-5进行下一步分离. Fr.5-5 (120 g)采用硅胶柱色谱[1.8 kg, 11 cm×35 cm, 石油醚/酸乙酯(V∶V=100∶1、30∶1、15∶1、10∶1、8∶2)]进行下一步分离, 最终合并为8个流分Fr.5-5-1~Fr.5-5-8. 后Fr.5-5-4 (2 g)经硅胶柱色谱, 以正己烷/乙酸乙酯洗脱后经制备HPLC (YMC-ODS柱, 体积分数为57%的乙 腈-水, 3 mL/min, λ=201/254 nm)得化合物2 (tR=36.0 min, 40 mg).
3.4 波谱数据
(10R,11E)-6-羟基-15,16-二降-半日花烷-5,8,11-三烯-7,13-二酮(1): 油状物, [α]20 D－15.6 (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λmax [log ε/(L•mol－1•cm－1)]: 261 (3.44) nm, 204 (3.80) nm. 1H NMR (CDCl3)和13C NMR (CDCl3)见表1; IR (KBr) νmax 3426, 2933, 1717, 1622, 1382, 1362, 1253, 1066 cm－1. HR-ESI-MS calcd for C18H25O3 [M＋H]＋ 289.1798, found 289.1798.
(5S,9S,10R,11E)-14,15,16-三降-半日花烷-7,11-二 烯-6-酮-13-羧酸甲酯(2): 油状物, [α]25 D＋52.6 (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λmax [log ε/(L•mol－1•cm－1)]: 274.5 (3.08), 236 (4.19), 203 (4.28) nm; 1H NMR (CDCl3)和13C NMR (CDCl3)见表1; IR (KBr) νmax 3437, 2929, 1725, 1670, 1660, 1436, 1342, 1239, 1168 cm-1. HR-ESI-MS calcd for C18H27O3 [M＋H]＋ 291.1955, found 291.1963.
(11E)-15,16-二降-半日花烷-7,11-二烯-6,13-二(3): 白色针状结晶, m.p. 141.0~143.0 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 6.65 (dd, J=15.8, 10.6 Hz, 1H, H-11), 6.22 (d, J=15.8 Hz, 1H, H-12), 5.89 (s, 1H, H-7), 2.99 (d, J=10.6 Hz, 1H, H-9), 2.30 (s, 3H, H-14), 2.08 (s, 1H, H-5), 1.75 (s, 3H, H-17), 1.57~1.50 (m, 2H, H-1a/2a), 1.48~1.41 (m, 1H, H-3a), 1.43~1.37 (m, 1H, H-2b), 1.29~1.20 (m, 2H, H-1b/3b), 1.19 (s, 3H, H-19), 1.15 (s, 3H, H-18), 1.00 (s, 3H, H-20); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 40.4 (CH2, C-1), 18.1 (CH2, C-2), 43.2 (CH2, C-3), 32.7 (C, C-4), 60.4 (CH, C-5), 199.4 (C, C-6), 128.9 (CH, C-7), 154.4 (C, C-8), 63.2 (CH, C-9), 42.9 (C, C-10), 143.9 (CH, C-11), 135.7 (CH, C-12), 197.5 (C, C-13), 27.7 (CH3, C-14), 22.9 (CH3, C-17), 33.7 (CH3, C-18), 21.8 (CH3, C-19), 16.06 (CH3, C-20); HR-ESI-MS calcd for C18H27O2 [M＋H]＋ 275.2006, found 275.2026. 数据与文献报道基本一致[24].
(11E)-6α-羟基-15,16-二降-半日花烷-8(17),11-二烯-13-酮(4), 浅黄色油状物. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 6.91 (dd, J=15.8/10.3 Hz, 1H, H-11), 6.09 (d, J=15.9 Hz, 1H, H-12), 4.96 (d, J=1.6 Hz, 1H, H-17), 4.68 (d, J=1.6 Hz, 1H, H-17), 4.44~4.40 (m, 1H, H-6), 2.52 (d, J=10.3 Hz, 1H, H-9), 2.45~2.35 (m, 2H, H-7), 2.28 (s, 3H, H-14), 1.64~1.53 (m, 1H, H-2b), 1.48~1.39 (m, 1H, H-3b), 1.41~1.34 (m, 2H, H-1b/2a), 1.23 (s, 3H, H-19), 1.20 (s, 3H, H-20), 1.20~1.17 (m, 1H, H-3a), 1.11 (d, J=2.0 Hz, 1H, H-5), 1.10~1.04 (m, 1H, H-1a), 1.02 (s, 3H, H-18); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 44.0 (CH2, C-1), 19.3 (CH2, C-2), 44.1 (CH2, C-3), 34.7 (C, C-4), 56.7 (CH, C-5), 68.9 (CH, C-6), 46.6 (CH2, C-7), 144.8 (C, C-8), 61.4 (CH, C-9), 40.5 (C, C-10), 145.8 (CH, C-11), 134.0 (CH, C-12), 198.2 (C, C-13), 27.4 (CH3, C-14), 112.1 (C, C-17), 33.7 (CH3, C-18), 24.0 (CH3, C-19), 18.3 (CH3, C-20); HR-ESI-MS calcd for C18H29O2 [M＋H]＋ 277.2162, found 277.2155. 数据与文献报道基本一致[25].
3.5 抗神经炎症活性研究
使用CCK-8法测试化合物对BV2的细胞毒性; 同时进行神经炎症活性测试: 研究模型为LPS诱导的BV2神经炎症模型, 米诺环素为阳性对照药. 首先评价化合物对神经细胞的毒性. 将细胞分为对照组、给药组. 对照组分为溶剂对照组和空白对照组; 给药组细胞首先用BV2培养, 然后更换为孔中含有CCK-8试剂的DMEM, 并加入定量药物进行处理, 设置低、中、高3种浓度(5、10和20 μmol/L)孵育2 h, 最后使用酶标仪在450 nm处读取每个孔的吸光度值(A), 计算各组细胞存活率, 实验重复3次.
细胞存活率(%)=(A1－A3)／(A2－A3)×100%
式中A1为药物组的吸光度; A2为溶剂对照组的吸光度; A3为空白对照组的吸光度.
采用NO试剂盒检测化合物对LPS诱导BV2细胞炎症活性. 将细胞分为对照组、LPS组、米诺环素组和给药组. LPS组用BV2培养24 h后, 弃去旧培养基, 用1 μg/mL LPS处理24 h; 米诺环素组使用10 μmol/L米诺环素预处理2 h后, 用1 μg/mL LPS处理24 h; 给药组用不同浓度(5、10和20 μmol/L)化合物预处理2 h, 用1 μg/mL LPS处理24 h. 处理后分别收集细胞上清液, 按要求加入NO试剂盒I和II的相应溶液, 用酶标仪在540 nm 处读取每个孔的吸光度值(A), 将其代入标准曲线 y=163.59(A)－6.5159中计算NO含量, 实验重复4次. 用于评价化合物对受损的神经细胞有无降低NO浓度的抗神经炎症作用.
采用GraphPad Prism 9.0软件对数据进行统计分析, 结果采用平均值±SEM表示. 三组数据使用单因素方差分析, 然后进行Tukey的事后检验. 所有检验均采用双侧P值, 认为P<0.1有统计学意义.
辅助材料(Supporting Information) 新化合物1和2的1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、ROESY、紫外、红外和HR-ESI-MS谱图. 这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.
(Lu, Y.)