HPLC技术对细菌基因组DNA碱基组成的精确测定

化学学报 ›› 2001, Vol. 59 ›› Issue (9): 1464-1470. 上一篇下一篇

研究论文

HPLC技术对细菌基因组DNA碱基组成的精确测定

李越中;胡玮;张禹清;张勇;韩冠君;黎志凤;王冰

山东大学生命科学系微生物技术国家重点实验室

发布日期:2001-09-15

Precise determination of base composition in bacterial genome DNA using HPLC techniques

Li Yuezhong;Hu Wei;Zhang Yuqing;Zhang Yong;Han Guanjun;Li Zhifeng;Wang Bing

Published:2001-09-15

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摘要/Abstract

高效液相色谱技术(HPLC)在精确分析细菌基因组DNA碱基组成时存在着重复性差和杂质干扰的问题。本研究结合反相HPLC技术对化学水解(高氯酸法和甲酸法)和生物酶水解(磷酸二酯酶Ⅰ和牛肠粘膜碱性磷酸酶)DNA的水解条件和产物进行分析，建立了一套系统的分析方法，改善了分析的重复性问题，排除了主要的误差来源，达到了对细菌DNA碱基组成精确分析测定的目的。

关键词: 高速液体色谱, 水解, 高氯酸, 甲酸, 磷酸二酯酶, 磷酸酶

Errors of reproducibility with high performance liquid chromatography (HPLC) are remarkably serious in determination of base composition of bacterial genome DNA, which is usually defined as guanine-plus-cytosine content [(G+C) mol%]. For partially purified DNA, salts are a major source of interference in enzymatic degradation and RNAs are a major source of interference in chemical degradation. This research analyzes the conditions and products by chemical (perchloric acid and formic acid) and enzymatic degradations (phasphodiesterase Ⅰ and bovine intestinal mucosa alkaline phophatase) of bacterial genome DNA using RP-HPLC, and introduces a systematic method to precisely measure the base composition of bacterial DNA.

Key words: HIGH SPEED LIQUID CHROMATOGRAPHY, HYDROLYSIS, PERCHLORIC ACID, FORMIC ACID, PHOSPHODIESTERASE, PHOSPHOKINASE

中图分类号:

O621

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李越中,胡玮,张禹清,张勇,韩冠君,黎志凤,王冰. HPLC技术对细菌基因组DNA碱基组成的精确测定[J]. 化学学报, 2001, 59(9): 1464-1470.

Li Yuezhong;Hu Wei;Zhang Yuqing;Zhang Yong;Han Guanjun;Li Zhifeng;Wang Bing. Precise determination of base composition in bacterial genome DNA using HPLC techniques[J]. Acta Chimica Sinica, 2001, 59(9): 1464-1470.

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